藍耳病防控成為如今養(yǎng)豬業(yè)的一大難題，曾幾何時，更是出現(xiàn)了談“藍”色變的現(xiàn)象，這一現(xiàn)象從側(cè)面反應(yīng)出藍耳病對我國乃至世界養(yǎng)豬業(yè)造成的嚴(yán)重危害和巨大損失。究竟如何才能防控好藍耳病呢？英國愛丁堡大學(xué)皇家獸醫(yī)學(xué)院的Alan L. Archibald教授于2017年2月發(fā)表于《PLOS Pathogens》上的文章”Precision engineering for PRRSV resistance in pigs:Macrophages from genome edited pigs lacking CD163 SRCR5 domain are fully resistantto both PRRSV genotypes while maintaining biological function”，似乎給出一個理想的思路，如果能夠用于現(xiàn)實生產(chǎn)實踐中，筆者認(rèn)為這是一個解決藍耳病較好的方案。

大量研究表明：豬繁殖與呼吸道綜合征病毒（PRRSV）作為一種單股正鏈RNA病毒，其感染的宿主細胞極其有限，主要局限于單核細胞與巨噬細胞。而CD163(Cluster of Differentiation 163)是PRRSV侵染細胞過程中需要的融合受體，而該受體中的SRCR5(Scavenger receptor cysteine-rich domain 5)是發(fā)生作用的主要位點。巨噬細胞在其表面會大量表達CD163蛋白，尤其是呼吸系統(tǒng)的巨噬細胞。這項研究中，研究者通過生命科學(xué)研究領(lǐng)域中熱門的CRISPR/Cas9基因剪切技術(shù)對豬的受精卵進行精確剪切，去除表達SRCR5基因外顯子，研究出基因缺失（或基因沉默）豬。（下圖為基因剪切原理圖）

然而，基因剪切技術(shù)有時也會出現(xiàn)剪切誤差。研究者通過大量驗證實驗，目的是保證后期研究所用的豬是否沉默了SRCR5。（下圖為驗證試驗圖）

接著，當(dāng)試驗用豬沒有問題之后，研究者通過支氣管肺泡灌洗（BAL）技術(shù)，從基因缺失豬中分離出肺泡巨噬細胞，再通過細胞表面分子標(biāo)記，利用流式細胞儀對其分離細胞進行了鑒定。

眾所周知，PRRSV主要感染細胞為豬的肺泡巨噬細胞，而感染細胞主要通過CD163受體。假設(shè)沒有CD163中的SRCR5關(guān)鍵區(qū)域，PRRSV是否仍然能夠感染肺泡巨噬細胞，這也是實驗分離細胞的目的。

研究中，分別選取了歐洲1型代表毒株H2，DAI，SU1-Bel對分離于不同豬的細胞進行感染。通過研究分析相應(yīng)細胞的感染率，RNA含量水平及TCID50，證明歐洲1型的豬藍耳病毒不能感染缺失掉SRCR5基因的肺泡巨噬細胞（PAMs）。（試驗結(jié)果見下圖）

備注：橫坐標(biāo)：Time post inoculation（接種后時間）

縱坐標(biāo)：Calculated TCID50/ml levers from VRNA levers（從病毒RNA水平計算每毫升中的TCID50水平）

              % of infected macrophages（感染的巨蝕細胞百分比）

藍耳病有兩個型，1型為歐洲型，2型為北美型。如果只是用1型進行感染試驗，顯然有些片面，況且對于研究的意義不大，因為我國目前主要流行毒株為北美型，因此研究者又利用具有代表性的北美毒株VR-2385和MN184進行了同樣的試驗。試驗結(jié)果同樣證明：來源于外周血單核細胞的基因缺失的巨噬細胞能夠抵抗PRRSV北美型毒株的感染。（試驗結(jié)果見下圖）：橫坐標(biāo)Time post inoculation（接種后時間），縱坐標(biāo)Calculated TCID50/ml levers from VRNA levers（從病毒RNA水平計算每毫升中的TCID50水平）

備注：橫坐標(biāo)：Time post inoculation（接種后時間）

縱坐標(biāo)：Calculated TCID50/ml levers from VRNA levers（從病毒RNA水平計算每毫升中的TCID50水平）

這里可能會有疑問：任意添加或缺失基因?qū)游锛毎麤]有影響嗎？對于缺失SRCR5外顯子的CD163，會影響到蛋白本身或是巨噬細胞正常的功能嗎？這些疑問，研究者最終對CD163的正常功能進行了實驗驗證，結(jié)果很樂觀，沒有任何影響，仍然在血紅蛋白-觸珠蛋白的清除作用中功能正常。

研究得出的結(jié)論是，不論是歐洲1型，還是北美2型，對于缺失了CD163中的SRCR5外顯子的巨噬細胞，其不感染豬藍耳病毒。為什么這樣說，病毒整個繁殖復(fù)制過程，需要的能量全部來自于感染細胞，假設(shè)想象一下，如果病毒不能夠感染細胞，它從哪里獲得能量來源呢？再通俗的解釋是，如果可以成規(guī)模地生產(chǎn)出缺少SRCR5外顯子的豬只，那么對于大家都害怕的藍耳病，對于你來說，一點都不是問題。如果這一天真得能到來，對于廣大養(yǎng)殖戶來說，該是多大的福音。

同時需要提醒養(yǎng)殖同仁的是：研究與實踐生產(chǎn)應(yīng)用，或是成規(guī)模地使用，差距不是一點半點，恐怕近幾年是實現(xiàn)不了。原因有以下幾個問題：一、成本問題，對于科學(xué)研究來說，投入是為了促進科學(xué)的進步，所以一些研究投入是不計成本的，而對于養(yǎng)殖者來說，利潤是目的，不可能只投入而沒有產(chǎn)出。二、關(guān)于量產(chǎn)問題，基因剪切技術(shù)現(xiàn)在不能保證百分百成功，也是在無數(shù)個體中不斷驗證，不斷篩選的過程才能選出幾只符合標(biāo)準(zhǔn)的，時間漫長，過程復(fù)雜，專業(yè)性要求極高，所以短期內(nèi)是不可能達到的。三、人才問題，類似豬只培育需要專業(yè)技術(shù)及背景知識的專家級人才，這樣人才的培養(yǎng)需要資金與時間的投入，所以短期內(nèi)也不太可能。

對于本研究，在細胞感染試驗過程中，雖然涉及到了歐洲1型代表株，也用到了北美2型代表株，可是分離出的巨噬細胞對于我國2006年高藍爆發(fā)后的HP-PRRSV毒株、或近幾年有明顯上升趨勢的NADC30-like毒株的易感性沒有給出驗證，因此對于當(dāng)前中國的藍耳流行現(xiàn)狀指導(dǎo)意義不是很大。

難道現(xiàn)在對于藍耳病就真得沒有好的防控方法嗎？“生物安全+疫苗免疫+飼養(yǎng)管理+豬群流動管理+……”,是防控疫病的方法。雖然說起來簡單，可真正能夠做到的又有多少豬場呢？方法很重要，但執(zhí)行更重要。對于當(dāng)前中國的藍耳病防控來說，生物安全和疫苗免疫是相對來說比較容易做到的，但對于小養(yǎng)殖戶的生物安全條件可能會受到忽視，“生物安全”意識落實到行動中，總會改善疫病。

參考文獻：Burkard C, Lillico SG, Reid E, Jackson B,Mileham AJ, Ait-Ali T, et al. (2017) Precision engineering for PRRSV resistance in pigs: Macrophages from genome edited pigs lacking CD163 SRCR5 domain are fully resistant to both PRRSV genotypes while maintaining biologicalfunction. PLoS Pathog 13(2): e1006206.

                   （成都天邦  李樂超）